福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑 北京同創(chuàng)正業(yè)生物科技供應(yīng)

    5）微量元素：硒是**常見的。①無(wú)蛋白無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（proteinfreemidium,PFM）這類培養(yǎng)基完全不含有動(dòng)物來(lái)源蛋白，但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段，以及類固醇***和脂類前體等，以替代動(dòng)物***、生長(zhǎng)因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒有蛋白或蛋白含量極低，有利于生物制品的分離純化。④化學(xué)組份限定無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（Chemicallydefinedmedia,CDM）此類培養(yǎng)基是目前****、**為理想的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基，所有成份的濃度都完全明確，即使其所添加的少量蛋白，也是可經(jīng)過(guò)純化處理，成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性，提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性，并有效降低了純化成本。嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基不在細(xì)胞培養(yǎng)基的傳統(tǒng)分類之列，其具體是指一類根據(jù)細(xì)胞特性、細(xì)胞培養(yǎng)工藝特點(diǎn)、使用者需求習(xí)慣而量身定制的細(xì)胞培養(yǎng)基，主要目的是提高細(xì)胞產(chǎn)率、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品**性和降低血清的使用等。個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基可能是無(wú)血清培養(yǎng)基，也可能是低血清培養(yǎng)基，**終是為滿足某一種或某一類生物制品的生產(chǎn)需求。2.培養(yǎng)基的基本組分細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營(yíng)養(yǎng)成分。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

    無(wú)動(dòng)物組分無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用三、細(xì)胞培養(yǎng)基的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法澄清度水是細(xì)胞培養(yǎng)基的溶劑。細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分只有完全溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取，細(xì)胞才能生長(zhǎng)增殖，因此細(xì)胞培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項(xiàng)目是通過(guò)對(duì)水溶解后的細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度。按中華******典2005年版二部附錄ⅨB進(jìn)行。pH值哺乳類動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)需要合適的酸堿度，pH過(guò)高或者過(guò)低都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。pH值的測(cè)定也可以檢查細(xì)胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定取規(guī)定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規(guī)定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細(xì)胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校準(zhǔn)后的酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。按中華******典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行；加入規(guī)定量的碳酸氫鈉（見表4-12）到上述溶液中，按中華******典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行。干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置水分會(huì)很快升**燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示產(chǎn)品中含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營(yíng)養(yǎng)成分有利于微生物生長(zhǎng)，控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細(xì)胞培養(yǎng)基的養(yǎng)分。湖北基礎(chǔ)培養(yǎng)基牌子無(wú)血清培養(yǎng)基適合于需要無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞系。

    體外動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要大量谷氨酰胺，利用量常超過(guò)其他必須氨基酸利用量的總和。維生素是維持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類，水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等；脂溶性維生素主要包括維生素A、D、E、K等；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A；大部分培養(yǎng)基中還有生物素。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分，沒有它們，酶便沒有活性，代謝活動(dòng)將無(wú)法進(jìn)行。比如，泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成?；d體蛋白和輔酶（如輔酶A），參與糖類、脂類和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng)；維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如，DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍，其原因是一方面不同種類維生素的作用不同，另一方面不同種類的細(xì)胞對(duì)維生素的需求也可能有較大差異，相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同。無(wú)機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動(dòng)所不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43—、SO42—、HCO3－等，主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡。

    4、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其不含碘化鉀，在絕大多數(shù)植物中，碘元素不是必需元素，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去除碘化鉀對(duì)植物**培養(yǎng)沒有影響，并且植物在脫離培養(yǎng)基進(jìn)行后期培養(yǎng)時(shí)仍可以從土壤等基質(zhì)中富集碘元素，去掉碘化鉀成分，也簡(jiǎn)化了培養(yǎng)基配制過(guò)程。5、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o，該替換減少的**根離子通過(guò)適當(dāng)增加**銨成分來(lái)補(bǔ)充，該替換主要基于兩個(gè)特征，一方面，nafeedta是可溶性螯合鐵，更容易被植物吸收，有利于植物葉綠體發(fā)育，另一方面，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等眾多植物**培養(yǎng)基原始ph偏低及ph波動(dòng)大的主要原因，本發(fā)明培養(yǎng)基中使用nafeedta之后，經(jīng)ph為，而植物**適宜生長(zhǎng)的ph一般為，因此，使用nafeedta既促進(jìn)了植物對(duì)鐵離子的吸收，又有利于培養(yǎng)基ph的穩(wěn)定。6、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量，增加了cuso4·5h2o、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇的用量，該改變特征在于，有效減少愈傷**玻璃化發(fā)生，減少酚類物質(zhì)產(chǎn)生，提高愈傷**的出愈率，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，優(yōu)化后的培養(yǎng)基出愈時(shí)間提前，對(duì)多種植物的愈傷**誘導(dǎo)是有益的。減血清培養(yǎng)基減少了實(shí)驗(yàn)中的血清干擾。

    維持15-20分鐘，可殺滅所有的繁殖體和芽胞。本法適用于耐高溫、耐濕物品的**，如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。（二）下向主要介紹高壓蒸氣**器**效果的驗(yàn)證方法高壓蒸氣**器使物品**后達(dá)到無(wú)菌要求，這是**實(shí)驗(yàn)中的基本保證。高壓**器**效果是否合格足實(shí)驗(yàn)成敗的**基礎(chǔ)**關(guān)鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解，不需高壓**外，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓**15-30分鐘。尤其是對(duì)無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基**不徹底，直接關(guān)系到對(duì)**的無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果。因此必須認(rèn)真對(duì)高壓**器進(jìn)行**效果的驗(yàn)證。為此我們提供了進(jìn)行**效果驗(yàn)證的一個(gè)簡(jiǎn)易可行的方法。1．試驗(yàn)材料(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5CFU/片。(2)121℃壓力蒸氣**化學(xué)指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓**20分鐘后備用。(4)O—150℃留點(diǎn)溫度計(jì)。2．方法與結(jié)果將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡(jiǎn)稱菌片）用無(wú)菌鑷子放人密封試管中?；瘜W(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓**器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如**器為二層，則需放10處。使用減血清培養(yǎng)基可以減少細(xì)胞培養(yǎng)中的血清干擾因素。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

減血清培養(yǎng)基減少了血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的干擾。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

    水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物，含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成（采用平衡鹽溶液溶解）與合成培養(yǎng)基（如MEM細(xì)胞培養(yǎng)基）以1:1的比例混合使用。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、***、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或**生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。此外，血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、*****等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。目前，血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5~20%，**常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜，批間差異大及存在**等外源污染風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)下游生物制品的分離純化和**性都存在較大的影響，在生物制*行業(yè)的使用也越來(lái)越少。因此，基于對(duì)血漿成份的分析，合成細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑