2025-04-06 01:01:23
在將進(jìn)行ChIP咳PCR實(shí)驗(yàn)的地點(diǎn)期近,不得打開(kāi)含有擴(kuò)增PCR產(chǎn)物約試幢。 確保您使用的抗體是在ChIP中給證過(guò)的抗體。關(guān)于ChIP抗體約完整選擇過(guò)程,請(qǐng)參見(jiàn)默克官網(wǎng)表觀遺傳學(xué)。如果您正使用ChIP抗體,請(qǐng)?jiān)黾涌贵w的解育時(shí)間。?一般1-10uq ChIP抗體是足夠的。但是,所需抗體量可能取決于您的靶輪蛋白相對(duì)豐度和抗體與靶標(biāo)的親和力。?在交聯(lián)前,單獨(dú)準(zhǔn)備一個(gè)平板,用于測(cè)定細(xì)胞數(shù)。重新評(píng)價(jià)每個(gè)反應(yīng)的細(xì)您數(shù)。增加您的細(xì)晚數(shù),特別是在嘗試檢測(cè)較任豐度的靶蛋白時(shí)。上海益啟抗體批發(fā)價(jià)。楊浦區(qū)Upstate抗體抗體咨詢報(bào)價(jià)
ChIlP檢測(cè)用磁力架 我們擁有多種用于Magna ChIP檢測(cè)的磁力架供您選擇∶常規(guī)Magna GrlP磁力架,,加強(qiáng)型PureProteome磁力架和高通量ChIP的理想之選——***推出的Magna GrlPHT96磁力架。PureProteome 磁力架 微珠捕獲效率高∶比較高比較強(qiáng)度的梯形磁體可捕獲?多達(dá)300微升磁珠 ***效率高∶可移動(dòng)磁體和獨(dú)特的渦旋內(nèi)表?面設(shè)計(jì)使微珠混合更加充分 操作性強(qiáng)∶符合人體工程學(xué)設(shè)計(jì)的磁力架可**插放1.5mL和2mL反應(yīng)管 Protein A/G beads 背景更低,富集倍數(shù)更高 Troubleshooting 問(wèn)題 可能的原因 建議的處理步驟楊浦區(qū)標(biāo)簽抗體抗體代理價(jià)Sigma抗體上海授權(quán)代理商。
非特異性條帶 抗體(一抗或二抗)濃度過(guò)高 降低抗體濃度。 SDS可能引起對(duì)固定蛋白條帶的非特 轉(zhuǎn)膜后,振蕩洗滌 異性結(jié)合 在操作過(guò)程中不使用SDS。 條帶擴(kuò)散 抗體(一抗或二抗)濃度過(guò)高 降低抗體濃度。 在凝膠上載入過(guò)多蛋白 減少蛋白上樣量。 黑色印跡,白色條帶, 抗體(一抗或二抗)濃度過(guò)高 減少抗體濃度,特別是HRP偶聯(lián)的二抗。 或信號(hào)快速減少 免疫沉淀 采用抗體-抗原沉淀(又叫免疫沉淀(IP))的方法將特異性蛋白從細(xì)胞或組織裂解液中分離出來(lái)。
對(duì)于成功的ChIP實(shí)驗(yàn),選擇適當(dāng)?shù)腃hIP抗體是**關(guān)鍵的步驟之一。即使是比較高質(zhì)量的抗體,即在經(jīng)典的Western blot驗(yàn)證中表現(xiàn)非常好的抗體,也不一定適合ChIP。比較好只考慮使用在ChIP實(shí)驗(yàn)中專門(mén)驗(yàn)證過(guò)的抗體。一般的, ChIP實(shí)驗(yàn)之后會(huì)用定量PCR(qPCR)來(lái)驗(yàn)證某一特定DNA序列是否與靶蛋白有關(guān)。研究人員可以采用這種經(jīng)典方法評(píng)估目標(biāo)蛋白與已知的靶基因之間的相互作用。 ChIP實(shí)驗(yàn)可以細(xì)分為以下幾個(gè)主要步驟: 樣品制備 蛋白與DNA交聯(lián) 細(xì)胞裂解和染色質(zhì)片段化 染色質(zhì)免疫沉淀H3抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?
對(duì)您的特定應(yīng)用,增加(和優(yōu)化)試劑濃度和培養(yǎng)時(shí)間。 檢查確保檢測(cè)試劑按建議的方法正確貯藏和使用。 從抗體緩沖液中除去吐溫。 配制少量工作液(1mL),在暗室中加入HRP偶聯(lián)二抗1mL。 應(yīng)觀察到可見(jiàn)的藍(lán)光。 在再雜交過(guò)程中可能有抗原損失。 信號(hào)較弱 在凝膠上的蛋白不足 在凝膠上載入更多的蛋白,或在載入之前濃縮樣品,或使用免疫沉淀以增加在凝膠運(yùn)行的中靶蛋白量。 使膜曝光時(shí)間延長(zhǎng)(1-2小時(shí))。 轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白過(guò)少--優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件,如轉(zhuǎn)膜緩沖液pH、膜類型和電壓等。Calbiochem抗體哪家靠譜?楊浦區(qū)標(biāo)簽抗體抗體代理價(jià)
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如果吸光度任于1.0,則延長(zhǎng)底物的解育時(shí)間使用之前應(yīng)確保所用的試劑已回復(fù)至室溫(20-28C)。使用不含或含有較任濃度(